Pracownia Inżynerii Komórkowej
Kierownik: Agata KLEJMAN
Zespół: Joanna CHILCZUK, Paulina KOZA
Pracownia Inżynierii Komórkowej powstała w marcu 2011 roku w Instytucie Biologii Doświadczalnej im. M. Nenckiego PAN. Zakres działalności Pracowni obejmuje produkcję zwierząt modyfikowanych genetycznie oraz wektorów wirusowych. Oferujemy usługi typu core-facility na potrzeby placówek naukowych, jak również instytucji R&D.
Stały wzrost zapotrzebowania na zwierzęta genetycznie zmodyfikowane wynika z faktu, iż stanowią one doskonałe narzędzie do badania funkcji genów in vivo oraz analizy mechanizmów wielu ludzkich chorób. W Pracowni Inżynierii Komórkowej (uprzednio działającej jako część Pracowni Neurobiologii Molekularnej) otrzymano dotychczas następujące linie zwierząt zmodyfikowanych genetycznie: szczury Syn-MMP-9, TR-GFP, TR-TAM67 Syn-ICER, Thy1-EGFP oraz myszy Nes-cyclinD2. Wyprodukowano również linię z wykorzystaniem wektorów lentiwirusowych (szczury Syn-TDP-43WT). Obecnie jesteśmy w trakcie wprowadzania techniki tworzenia zwierząt ‘knock-out’ .
Lentiwirusy, zdolne do infekcji zarówno dzielących, jak i nie dzielących się komórek, znalazły szerokie zastosowanie w nauce i medycynie. Ich zdolność integracji do genomu, oznacza stabilną i stałą ekspresję wprowadzonego do komórek transgenu. Lentiwirusy są wykorzystywane obecnie jako alternatywa często mało wydajnej transfekcji komórek
w hodowlach in vitro (~100% wydajność infekcji), oraz jako wektory umożliwiające wprowadzenie transgenu do narządów dorosłych zwierząt, a także zarodków. W Pracowni dotychczas udało się stworzyć m.in. wektory lentiwirusowe kodujące Syn-GFP, Syn-ICER, Syn-TDP43 czy wektor umożliwiający ekspresję sekwencji wyciszającej shICER.
Pracownia jest w pełni wyposażona w nowoczesny sprzęt laboratoryjny do transgenizacji i produkcji wektorów wirusowych. W odrębnym pokoju znajdują się regały IVC oraz szafy wentylowane, umożliwiające hodowlę i rozmnażanie myszy i szczurów. Do pracowni, działającej w podwyższonym standardzie hermetyczności, dostęp mają wyłącznie osoby upoważnione.
Więcej informacji na stronie pracowni: http://celleng.nencki.gov.pl/ oraz pod adresem: lce@nencki.gov.pl
Oferta Pracowni:
Otrzymywanie zwierząt modyfikowanych genetycznie:
- Przygotowanie konstruktów (dobór promotora, klonowanie, sprawdzenie ekspresji konstruktu in vitro) używanych do transgenizacji
- Mikroinjekcja zygot (myszy i szczurów)
- metodą tradycyjną (wprowadzanie liniowego DNA do jednego z przedjądrzy)
- z użyciem wektorów wirusowych (iniekcja pod osłonkę przejrzystą) - Transfer zarodków do jajowodów samic biorczyń
- Wazektomia samców
- Pobieranie fragmentu tkanki, izolacja DNA
- Genotypowanie
Wektory wirusowe (głównie lentiwirusowe):
- Ekspertyza naukowa (m.in. dobór promotorów w celu uzyskania ekspresji specyficznej tkankowo, projektowanie i konstruowanie wektorów zawierających sekwencje wyciszające)
- Klonowanie, przygotowanie konstruktów do produkcji wirusów
- Produkcja wektorów wirusowych (lenti-, adenowirusowych)
- Analiza miana otrzymanych wirusów
- Doświadczenia z użyciem wektorów wirusowych (m.in. wyprowadzenie linii komórkowych na bazie infekcji wirusowych).
Wybrane publikacje
Bieganska K, Figiel I, Gierej D, Kaczmarek L and Klejman A Silencing of ICERs (Inducible cAMP Early Repressors) results in partial protection of neurons from Programmed Cell Death. In preparation
Konopka W, Duniec K, Klejman A, Wawrzyniak W, Owczarek D, Gawrys L, Maleszewski M, Mallet J and Kaczmarek L Tet system in the brain: transgenic rats and lentiviral vectors approach, Genesis, 2009 Apr;47(4):274-80.
Wilczynski GM, Konopacki FA, Wilczek E, Lasiecka Z, Gorlewicz A, Michaluk P, Wawrzyniak M, Malinowska M, Okulski P, Kolodziej LR, Konopka W, Duniec K, Mioduszewska B, Nikolaev E, Walczak A, Owczarek D, Gorecki DC, Zuschratter W, Ottersen OP, Kaczmarek L. Important role of matrix metalloproteinase 9 in epileptogenesis. J Cell Biol. 2008 Mar 10;180(5):1021-35.
